AFERIÇÃO DO PROTOCOLO LABORATORIAL DE EXTRAÇÃO DE EXTRATO ETÉREO

Laboratory protocol of extraction of ethereal extract

ABSTRACT - The objective of this study was to evaluate the laboratory protocol for the extraction of ethereal extract from samples of corn, hay and soybean meal. For this, the duration of the analysis, the weight of the sample and the number of repetitions were tested, in order to observe the influence of these factors on the observed final value. The data were submitted to statistical analysis by the F-test and Student-Newman-Kells. Statistical difference was verified for the ethereal extract values (P<0.05) of the interaction between the weight of the samples and the time of extraction. No significant effect of the number of replicates of analyzed samples on the ethereal extract values of maize, soybean meal and thymine hay was verified. It is concluded that for the determination of ether extract it is necessary to use samples containing four grams, with the analysis of at least two replicates per sample and total time of extraction of the fat of four hours.

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Introdução

A presença e a quantidade de nutrientes presentes nos alimentos são variáveis, sendo assim, a composição bromatológica dos ingredientes da ração deve ser considerada na formulação das rações, de modo que atenda as exigências nutricionais para produção. A concentração de lipídios na dieta, geralmente é bastante baixa, variando entre 1% e 4% da matéria seca. Essa fração, todavia, é importante do ponto de vista nutricional devido à sua elevada concentração energética, em média 2,25 maior que a dos carboidratos (SILVA e QUEIROZ, 2006) O método de Soxhlet (1879) ainda é utilizado para determinação da gordura de vegetais. O método consiste na lavagem da amostra por 4 a 12 horas, a depender de sua natureza e processamento, e o resíduo extraído é recolhido para quantificação. A principal desvantagem do método de Soxhlet é o baixo rendimento analítico, em função do tempo necessário para finalização do procedimento. O tempo preconizado para a realização das análises possui ampla variação entre as metodologias. Em função dessa variação, é possível que diferentes tempos utilizados para análise, o peso da amostra e o número de repetições analisadas alterem os valores encontrados após a análise das amostras. Objetivou-se avaliar a metodologia de extração de gordura descrita por Silva e Queiroz (2006) em amostras de milho moído, farelo de soja e feno de Tifton 85 em função do tempo de análise, do peso de amostra e do número de repetições realizadas durante a análise.

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Revisão Bibliográfica

Os lipídios constituem a classe de compostos que incluem gorduras, óleos, pigmentos e ceras, além de outros compostos como colesterol, fosfolipídios e lipoproteínas. São substâncias insolúveis em água, porém solúveis em éter, clorofórmio, benzeno e outros solventes orgânicos chamados de extratores (SINDIRAÇÕES, 2013). Estas substâncias solúveis contidas na amostra seca são dissolvidas através da extração com éter, o qual é evaporado desta solução gordurosa. (SILVA e QUEIROZ, 2006). De acordo com Pinheiro et al. (2005) as gorduras servem principalmente como fornecedores de energia, sendo oxidadas nas células durante a respiração celular. Alimentos ricos destas substâncias costumam ser chamados de alimentos energéticos. Segundo Cecchi (2007), a extração de gorduras pode ser feita com solvente a quente, mistura de solventes a frio e extração de gordura ligada a outros compostos. A extração a quente pode ser pelos métodos de Soxhlet ou Goldfisch e a mistura de solventes pelo método de Bligh-Dyer. Para produtos como leite e pães a gordura precisa ser desligada de outras substâncias para quantificação, por isso se procede hidrólise antes da extração. Essa hidrólise pode ser ácida, pelos processos de Gerber ou Babcock ou alcalina, método de Rose-Gottlieb e Mojonnier. Silva e Queiroz (2006) descrevem dois métodos de extração de gordura. O método a quente é realizado em aparelho do tipo Goldfisch com temperatura mais elevada. A extração é feita com éter de petróleo e tem duração de 04 ou 16 horas. O método a frio é feito em extrator Soxhlet e o solvente utilizado é o éter sulfúrico, que possui ponto de ebulição por volta dos 35°C. Ambos os métodos de destilação são precedidos pela secagem dos cartuchos de amostra, a fim de diminuir o erro na determinação. Amostras pesando 2 g são dispostas no aparelho extrator juntamente com 4 mL do solvente escolhido.

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Materiais e Métodos

A aferição da metodologia para extração de gordura foi realizada com amostras de milho moído, farelo de soja e feno de Tífton 85. Na metodologia descrita por Silva e Queiroz (2006) estão dois métodos de extração de gordura. O método a frio que é feito em extrator Soxhlet e o solvente utilizado é o éter sulfúrico, que possui ponto de ebulição por volta dos 35°C. E o método a quente, utilizado neste experimento, que usualmente é realizado em aparelho do tipo Goldfisch com temperatura mais elevada, com extração feita por éter de petróleo e tem duração de 04 ou 16 horas. O método de destilação foi precedido pela secagem dos cartuchos de amostra, a fim de diminuir o erro na determinação. As amostras foram submetidas à extração em aparelho extrator do tipo Soxhlet com 02 diferentes tempos de lavagem (04 e 08 horas). A recomendação de período de lavagem é de quatro horas em temperatura máxima (5 a 6 gotas por segundo) ou 16h00 em temperatura baixa (2 a 3 gotas por segundo). Além do tempo de extração variaram os pesos das amostras (02, 04 e 06 gramas) e o número de repetições (02 e 04), totalizando 06 tratamentos e 36 parcelas. As amostras foram dispostas no aparelho extrator juntamente com 04 mL do solvente. O éter foi recuperado no fim da extração. Após a destilação foi realizada a evaporação do éter das amostras em capela. As amostras e os copos utilizados na destilação foram secos em estufa a 105° C por, no máximo, até 30 minutos em virtude do aumento excessivo de temperatura facilitar a oxidação das gorduras e fornecer resultados elevados. A determinação de gordura foi realizada com a pesagem do copo extrator antes e após a extração, de forma que, a diferença de peso corresponde ao peso da gordura extraída. Os dados foram corrigidos para a matéria seca dos alimentos e submetidos à análise estatística, utilizando-se o programa SAEG (Sistema para Análises Estatísticas, 2007), por meio de teste F e de Student-Newman-Kells (SNK) a 5% de probabilidade.

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Resultados e Discussão

Os resultados observados de extrato etéreo das amostras de milho moído, farelo de soja e Tífton 85 estão descritos nas Tabelas 1 e 2. Foi verificada diferença estatística significativa para os valores de extrato etéreo (P<0,05) na interação entre o peso das amostras e o tempo de extração nos três alimentos testados.Esses resultados evidenciam que o tempo de lavagem e o tamanho da amostra intereferm no resultado final de gordura extraída No milho observou-se que, com o aumento do tamanho da amostra houve redução na extração de gordura, mesmo no tratamento com maior tempo de extração. Dessa forma, entende-se que para amostras muito grandes, o tempo necessário para a completa extração da gordura é maior que o descrito na metodologia de Silva e Queiroz (2006). Da mesma forma, amostras pequenas submetidas a períodos longos de extração podem estar sujeitas a deterioração de material e perdas de composição nutricional. A determinação de gordura é uma análise que requer longo tempo, e possui limitações quanto ao número possível de amostras a serem analisadas de uma única vez no equipamento e quanto ao uso comum do equipamento no laboratório. Durante o período de análise foi observado presença de caruncho nas amostras de milho e soja, mesmo quando acondicionadas em potes fechados. Lopes et al. (1988) em estudo sobre a perda de peso e mudanças na composição química do milho devido ao carunchamento perceberam perda de peso conforme o grau de infestação. Souza et al. (2011) observaram aumento linear da matéria seca e aumento quadrático do extrato etéreo à medida em que houve aumento no nível de carunchamento. Em contrapartida, Antunes et al. (2011) estudando as características físico-químicas de milho atacados durante o armazenamento, observaram que a gordura foi o constituinte químico que mais diminuiu, com redução superior a 40%. Sendo assim, os resultados podem ter sido alterados pelo armazenamento inadequado das amostras e da redução dos constituintes nutricionais. Uma forma de evitar a perda das características nutricionais e a diminuição do nível de infestação por pragas é manter as amostras refrigeradas. Não foi verificado efeito significativo do número de repetições de amostras analisadas sobre os valores observados de extrato etéreo (P>0,05) para amostras dos três alimentos testados (Tabela 2). O número elevado de repetições é adotado para reduzir a variação dos dados e reduzir os erros, no entanto, neste trabalho foi possível observar que duas repetições foram suficientes para obter valores próximos à média.

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Conclusões

Ao analisar o teor de gordura de amostras de milho, farelo de soja e feno de Tífton pode-se adotar na rotina de laboratório duas repetições por amostra. O tamanho da amostra pode interferir na análise de extrato etéreo e evidencia a necessidade de maior tempo para a total extração da gordura em amostras maiores. Para a determinação do extrato etéreo é indicada a utilização de amostras contendo 4 gramas, duas repetições por amostra e tempo total de extração da gordura de 4 horas.

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Gráficos e Tabelas

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Referências

ANTUNES, L. E. G.;VIEBRANTZ, P. C.;GOTTARDI, R.; DIONELLO, R. G. Características físico-químicas de grãos de milho atacados por Sitophilus zeamais durante o armazenamento. Revista brasileira de engenharia agrícola e ambiental, v.15, n.6, p.615-620, 2011.   CECCHI, H. M. Fundamentos teóricos e práticos em análise de alimentos. São Paulo; Editora Unicamp. 2007. 207p.   LOPES, D. C.; FONTES, R. A.; DONZELE, J. L. Perda de peso e mudanças na composição química do milho (Zea mays, L.) devido ao carunchamento. Revista da Sociedade Brasileira de Zootecnia, v.17, p.367-371, 1988.   PINHEIRO, D. M.; PORTO, K. R. A.; MENEZES, AMS. A Química dos Alimentos: Carboidratos, lipídeos, proteínas, vitaminas e minerais. Maceió: Edufal, 2005.   SAEG. SAEG: sistema para análises estatísticas, versão 9.1. Viçosa: UFV, 2007.   SILVA, D. J.; QUEIROZ, A. C. Análise de alimentos (métodos químicos e biológicos). 3.ed. Viçosa: Universidade Federal de Viçosa, 2006. 235p.   SOXHLET, F. Die gewichtsanalytische Bestimmung des Milchfettes. Dingler’s Polytechnisches Journal, v. 232, n. 461-465, 1879.   SINDIRAÇÕES, Compêndio Brasileiro de Alimentação animal. p. 64-75, 2013.   SOUZA, A. V. C. ; SANTOS, J. P. ; LOPES, D. C. . Composição química do milho em diferentes níveis de carunchamento. In: 37 Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Zootecnia, 2000, Viçosa. 37 Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Zootecnia, 2000. p. 262-262.