AVALIAÇÃO DOS EFEITOS COCCIDICIDAS DE ÓLEO ESSENCIAL DE LIPPIA GRACILIS EM EIMERIA SPP. ISOLADAS DE PEQUENOS RUMINANTES DO ESTADO DO MARANHÃO.
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RESUMO -
O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos coccidicidas de óleo essencial de Lippia gracilis (genótipo 201) em oocistos de Eimeria spp. de pequenos ruminantes do estado do Maranhão. A atividade do óleo essencial foi avaliada pela porcentagem de oocistos não esporulados, esporulados e degenerados, comparados aos controles e as concentrações letais (CL50) e inibitórias (CI50) foram obtidas por por análise de regressão. O óleo essencial de Lippia gracilis apresentou como composto majoritário o monoterpeno carvacrol (35,28%) e atividade coccidicida, com concentração letal (CL50) de 4,56 mg/ml, avaliada nas concentrações de 10,0; 7,0; 4,9; 3,43; 2,40; 1,68; 1,17 e 0,82 mg/ml. O Carvacrol demostrou atividade coccidiostática, de inibição da esporulação, com concentração inibitória (CI50) de 0,420 mg/ml, avaliada nas concentrações de 4,8; 2,4; 1,2; 0,6; 0,3 e 0,15 mg/ml. Estudos sobre a atividade biológica de produtos naturais sobre oocistos de Eimeria spp. devem ser estimulados.
EVALUATION OF THE COCCIDICID EFFECTS OF ESSENTIAL OIL OF LIPPIA GRACILIS IN EIMERIA SPP. ISOLATED FROM SMALL RUMINANTS OF THE STATE OF MARANHÃO.
ABSTRACT - The aim of the present work was to evaluate the coccidicidal effects of essential oil of Lippia gracilis (genotype 201) in oocysts of Eimeria spp. from small ruminants in the state of Maranhão. The activity of the essential oil was evaluated by the percentage of non sporulated, sporulated and degenerate oocysts, compared to controls and lethal (LC50) and inhibitory (IC 50) concentrations were obtained by regression analysis. The essential oil of Lippia gracilis showed as major compound the monoterpene carvacrol (35.28%) and coccidicidal activity, with a lethal concentration (LC50) of 4.56 mg / ml, evaluated at concentrations of 10.0; 7.0; 4.9; 3.43; 2.40; 1.68; 1.17 and 0.82 mg / ml. Carvacrol demonstrated coccidiostatic activity, of inhibition of sporulation, with inhibitory concentration (IC 50) of 0.420 mg / ml, evaluated at the concentrations of 4.8; 2,4; 1,2; 0.6; 0.3 and 0.15 mg / ml. Studies on the biological activity of natural products on oocysts of Eimeria spp. should be encouraged.Introdução
No Brasil, a caprinocultura é uma atividade de grande importância econômica (AMANCIO; PEREIRA, 2014) ocorrendo principalmente no Nordeste do Brasil onde estão concentrados 91% do rebanho caprino (IBGE, 2011). Coccidiose é uma doença parasitária, de grande impacto econômico, causada por protozoários do gênero Eimeria spp., parasitas intracelulares obrigatórios, de ocorrência mundial e com uma ampla distribuição no Brasil em pequenos ruminantes (LIMA, 2004). Smith e Sherman (1994) e Lima (2004) verificaram que 16 espécies de Eimeria podem parasitar caprinos, com patogenicidade moderada e severa. Os sinais mais evidentes são fezes diarreicas de coloração escura, podendo apresentar muco e sangue, desidratação, perda de apetite e consequentemente perda de peso (LIMA, 2004), fatores estes que limitam consideravelmente a caprinocultura. A utilização de compostos bioativos pode se tornar uma alternativa eficiente no controle de Eimeria spp. O uso de plantas do gênero Lippia spp. pode ser uma alternativa economicamente viável devido ao potencial dos constituintes bioativos presentes e baixa toxicidade (SOARES; DIAS, 2013). São escassos os trabalhos científicos sobre a atividade biológica de óleos essenciais de L. gracilis e do monoterpeno Carvacrol sobre Eimeria de caprinos. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho é avaliar os efeitos coccidicidas de óleo essencial de Lippia gracilis em Eimeria spp. isoladas de pequenos ruminantes do estado do Maranhão.Revisão Bibliográfica
O controle da Eimeriose tem se realizado com adoção de medidas sanitárias e de manejo (LIMA, 2004). As medidas sanitárias como a limpeza diariamente das instalações, visam impedir ou diminuir a ingestão dos oocistos esporulados. O tratamento com a utilização dos quimioterápicos é realizado em animais que apresentam sinais clínicos da Eimeriose (LIMA, 2004). Diante desse problema o controle de parasitos gastrintestinais por meio da utilização da fitoterapia apresenta uma alternativa viável e barata. Pesquisas com plantas medicinais voltadas para aplicação em animais ainda é pouco explorada, considerando a grande variedade de espécies encontradas em todo o Brasil. Lippia gracilis é conhecida popularmente como alecrim-da-chapada, e seu óleo essencial apresenta atividade antimicrobiana, sendo utilizado para o tratamento de doenças cutâneas, queimaduras, feridas, e úlceras. Cruz et al., (2013) constatou que Carvacrol e Timol são os principais constituintes majoritários do óleo com ação bactericida, fungicida e acaricida (REMMAL et al., 2011). Não constam na literatura, trabalhos científicos que reportam atividade anticoccídica de óleos essenciais de L. gracilis e do monoterpeno Carvacrol sobre Eimeria de caprinos.Materiais e Métodos
O óleo essencial de Lippia gracilis (genótipo 201) foi obtido por hidrodestilação das folhas de acordo com Guenther (1972). A análise da composição química foi feita através da cromatografia gasosa (Shimadzu, modelo QP5050A, Japão) acoplada a um espectrômetro de massa (Shimadzu, GC-MS, Japão). A análise quantitativa dos constituintes químicos foi realizada por cromatografia de gás de ionização de chama (FID), utilizando um Shimadzu GC-17A (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japão). Os componentes de óleo essencial foram identificados por comparação dos seus espectros de massa com os espectros disponíveis na base de dados de equipamentos.
Foram utilizadas concentrações iniciais de 10,0; 7,0; 4,9; 3,43; 2,40; 1,68; 1,17; 0,82 mg/ml. Além disso, foi utilizado Carvacrol (SIGMA-ALDRICH®) nas concentrações de 4,8; 2,4; 1,2; 0,6; 0,3 e 0,15 mg/ml. Todas as diluições foram preparadas em Triton X-100 a 1%, em triplicata e utilizado Triton X-100 a 1%, em triplicata, como controle.
Os oocistos foram isolados de fezes de caprinos da Região de Chapadinha e Baixo Parnaíba. O isolamento foi procedido pelo método de centrífugo-flutuação em solução de sacarose saturada (SHEATHER, 1923). As espécies foram identificadas de acordo com Levine (1963). Foram realizadas as análises da destruição e de inibição da esporulação de oocistos de Eimeria spp (REMMAL et al., 2011). As amostras contendo 1500 oocistos, incluindo os controles, foram incubadas a 28°C por 48 horas. Após esse período os oocistos foram quantificados de acordo com Gordon e Whitlock (1939). A atividade dos óleos essenciais foi avaliada pela porcentagem de oocistos não esporulados, esporulados e degenerados, comparados aos controles. As concentrações letais (CL50) e inibitórias (CI50) para 50% da população foram calculadas por análise de regressão, após transformação logarítmica dos valores das diluições, empregando o programa Graph Pad Prism Versão 6.0., de acordo com Jitviriyanon et al. (2016).
Resultados e Discussão
Foram identificadas oito espécies de Eimeria spp. dos caprinos sendo estas E. arloingi, E. christenseni, E.joichijevi, E. hirci, E. ninakohlyakirnovae, E. caprovina e E.apsheronica, onde a E.ninakohlyakirnovae. Cunha et al., (2016) realizando estudo de identificação das espécies de Eimeria spp. de caprinos da região de Chapadinha encontrou as espécies descritas nesse trabalho.
A avaliação do óleo essencial de Lippia gracilis, de Genótipo 201, apresentou como composto majoritário o monoterpeno carvacrol (35,28%). Dentre os constituintes principais dos óleos essenciais de várias plantas aromáticas, tais como Thymus vulgaris, L. (Lamiaceae), Origanium compactum (Labiatae), Acalypha phleoides (Euphorbiaceae), Lippia sidoides (Verbenaceae), o carvacrol demonstrou ser o composto majoritário (PEIXOTO-NEVES et al., 2010).
Os resultados demonstraram que o óleo essencial citado tem alta atividade coccidicida. A partir da concentração de 2,4 mg/ml de óleo essencial de Lippia gracilis nota-se ligeira diminuição na viabilidade dos oocistos (Figura 1). Essa diminuição se intensifica até a total destruição dos oocistos na concentração de 7,0 mg/ml, apresentando concentração letal (CL50) de 4,56 mg/ml (Figura 1). Testes para avaliação da concentração inibitória de óleo essencial Lippia gracilis não foram realizados, pois ainda estão em fase de padronização.
A ação coccidicida mais utilizada atualmente, com hidróxido de amônio em alta concentração (5%), é resultante da capacidade da ligação entre íons hidroxila e lipídio na membrana celular, onde a saponificação do lipídio leva à disfunção da membrana celular e a morte celular (MARIS, 1995). Pela sua eficiente ação coccidicida, ele é muito utilizado nas granjas avícolas. No entanto, o uso dessa substância em larga escala tem vários inconvenientes como deposição de resíduos no ambiente entre outros.
Óleos essenciais podem ter alta atividade coccidicida devido às suas propriedades hidrofóbicas e baixo peso molecular que desintegram a membrana externa permeável da célula, provocando a liberação de lipopolissacarídeos, porinas, proteínas, ácida graxa e vazamento de metabólitos e enzimas como aminoácidos aromáticos e nucleotídeos, resultando na permeabilidade crescente da membrana citoplasmática (BOYOM et al., 2003; REMMAL et al., 2011). Adicionalmente, a característica hidrofóbica dos óleos essenciais resultam no aumento da permeabilidade da membrana tendo como consequência a degeneração dos oocistos (REMMAL et al., 2011). Nesse sentido os óleos essenciais têm propriedades anti-coccidicas por difusão através das membranas celulares desses parasitas, aumento da permeabilidade das membranas celulares e por interferirem no metabolismo celular levando à morte celular (ALLEN et al., 1997).
No estudo com Carvacrol, em concentrações acima de 1,2 mg/ml, somente 20%, aproximadamente, dos oocistos esporularam, indicando ação coccidiostática ou inibitória, e a concentração inibitória (CI50) detectada foi de 0,420 mg/ml (Figura 1). Não foram realizadas avaliações das concentrações letais com Carvacrol, devido a pequena quantidade de oocistos isolados.
Conclusões
O genótipo 201 de Lippia gracilis utilizado na análise da destruição dos oocistos de Eimeria spp., apresentou atividade coccidicida com a concentração de letal CL50 de 4,56 mg/ml. O Carvacrol demostrou atividade coccidiostática atuando na inibição da esporulação dos oocistos, com concentração inibitória CI50 de 0,970 mg/ml. Mais estudos devem ser estimulados com produtos naturais para verificação da atividade coccidicida, dada a importância das eimerioses na caprinocultura.Gráficos e Tabelas
