Eficácia in vitro do extrato purificado de taninos condensados de Mimosa tenuiflora (Wild) Poiret. no controle anti-helmíntico de caprinos
Almy de Sá Carvalho Filho1, Virgínia Renata Tenório Fernando de Oliveira2, Diana Rocha dos Anjos3, Marco Hamilton Barros da Costa Filho4, Dulciene Karla de Andrade Silva5, Rodrigo Mendonça de Lucena6, Claúdio Rangel Cavalcanti Filho7, Safira Valença Bispo8
1 - Discente de Zootecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns.
2 - Zootecnista da Universidade Federal do Vale do São Francisco – UNIVASF
3 - Discente do Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal e Pastagens, UFRPE/UAG - Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns
4 - Mestre em Ciência Animal e Pastagem Universidade Federal Rural de Pernambuco /Unidade Acadêmica de Garanhuns
5 - Professora Adjunta da Universidade Federal Rural de Pernambuco /Unidade Acadêmica de Garanhuns
6 - PNPD da Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns.
7 - Discente de Zootecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns.
8 - Professora Adjunta da Universidade Federal Rural de Pernambuco /Unidade Acadêmica de Garanhuns
2 - Zootecnista da Universidade Federal do Vale do São Francisco – UNIVASF
3 - Discente do Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal e Pastagens, UFRPE/UAG - Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns
4 - Mestre em Ciência Animal e Pastagem Universidade Federal Rural de Pernambuco /Unidade Acadêmica de Garanhuns
5 - Professora Adjunta da Universidade Federal Rural de Pernambuco /Unidade Acadêmica de Garanhuns
6 - PNPD da Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns.
7 - Discente de Zootecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco/Unidade Acadêmica de Garanhuns.
8 - Professora Adjunta da Universidade Federal Rural de Pernambuco /Unidade Acadêmica de Garanhuns
RESUMO -
As infecções por nematódeos gastrintestinais correspondem a uma das principais causas limitantes na produção de pequenos ruminantes em todo o mundo. Na busca por novas alternativas de controle efetivo desses parasitos, avaliamos o potencial antihelmíntico do extrato purificado de taninos condensados de folhas com haste de Mimosa tenuiflora (Willd) Poiret sobre o desenvolvimento larval de nematódeos que acometem caprinos. A determinação e quantificação dos taninos condensados (TC) foi realizada pelo método dos fenóis precipitáveis em proteína (PPP). A eficácia foi avaliada pelo teste de desenvolvimento larval (TDL), utilizando-se as concentrações 37,5; 75; 150; 300; 350 mg/ml de extrato de TC. A eficácia máxima obtida no TDL foi de 99,6% na concentração de 350 mg/mL de TC. A M. tenuiflora apresentou atividade larvicida in vitro sobre Haemonchus contortus de caprinos, tornando-se uma excelente alternativa no controle de nematódeos gastrintestinais de pequenos ruminantes.
Palavras-chave: caatinga, compostos secundários, nematódeos gastrintestinais, semiárido
In vitro efficacy of the purified extract of condensed tannins of Mimosa tenuiflora (Wild) Poiret. to the anthelmintic control in goats
ABSTRACT - The gastrointestinal nematodeos infections represent one of the main causes in limiting the production of small ruminants around the world. Looking for new alternatives to the effective control of these parasites, we evaluated the anthelmintic potential of purified extract of condensed tannins of Mimosa tenuiflora (Willd) Poiret on the larval development of nematodes that affect goats. The determination and quantification of condensed tannins (TC) provided by the method of precipitable protein phenols (PPP). Efficacy was assessed by larval development test (TDL), using the concentrations 37.5; 75; 150; 300; 350 mg/ml of condensed tannin extract. The maximum efficacy obtained in TDL was 99.6% at the concentration of 350 mg / ml of condensed tannins. M. tenuiflora showed larvicidal activity in vitro on Haemonchus contortus goats, making it an excellent alternative to control of gastrointestinal nematodes in small ruminants.Keywords: caatinga, secondary compounds, gastrointestinal nematodes, semiarid
Introdução
Os nematódeos gastrintestinais que acometem pequenos ruminantes são responsáveis por consideráveis impactos econômicos na pecuária mundial, principalmente em países tropicais como o Brasil. Usualmente, o controle dos nematódeos gastrintestinais é realizado com a administração de anti-helmínticos sintéticos. Contudo, os custos dos medicamentos, a alta probabilidade de resíduos no produto final de origem animal e o crescente desenvolvimento de resistência à maioria dos anti-helmínticos comercializados, tornaram a busca por controles alternativos desses parasitos imprescindível (Athanasiadou et al., 2008; Max et al., 2009) Como meio alternativo, compostos químicos de plantas com fatores bioativos no controle do parasitismo gastrintestinal estão sendo pesquisados. (Almeida et al., 2007). Estes constituintes são compostos polifenólicos, ou taninos condensados pertencentes ao grupo dos compostos secundários sintetizados por alguns vegetais. Seus efeitos sobre a resistência do hospedeiro ao parasitismo têm sido os mais estudados (Hoste et al., 2006). A região de Caatinga abriga uma grande biodiversidade de plantas com potencial em síntese de compostos secundários. Diante deste cenário, neste trabalho avaliamos o extrato purificado de taninos condensados de folhas com hastes de Mimosa tenuiflora (Willd) Poiret em testes de desenvolvimento larval in vitro sobre nematódeos gastrintestinais de caprinos para avaliação da existência de propriedades anti-helmínticas.Revisão Bibliográfica
O controle dos nematódeos gastrintestinais através de desverminações é realizado na maioria das vezes sem base técnica, visando apenas atender a um programa fixo de controle, consequentemente, tem sido observada crescente redução na eficácia dos produtos (Molento et al., 2004). Os nematódeos gastrintestinais se apresentam como os parasitos de maior importância na pecuária, onde se destacam o Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Strongyloides spp, Cooperia curticei e Oesophagostomum columbianum (Amarante et al., 2004). A fitoterapia tem sido indicada como alternativa, principalmente, para reduzir os custos dos tratamentos químicos e prolongar a vida útil dos produtos anti-helmínticos disponíveis no mercado, pois diminui a pressão de seleção sobre os isolados de nematódeos (Yoshihara, 2011). Oliveira et al. (2011) em seus estudos, destacam que dentre as alternativas que estão sendo pesquisadas para o controle do parasitismo gastrintestinal, o uso de plantas bioativas, ou seja, com potencial terapêutico. Dentre as hipóteses propostas para explicar a atividade anti-helmíntica dos taninos condensados, apresenta-se o seu efeito indireto destes composto ao aumentar a resposta imune de pequenos ruminantes contra parasitos. De acordo com essa teoria, os taninos condensados protegem as proteínas da degradação ruminal, ao formarem complexos, aumentando sua disponibilidade no intestino delgado (Hoste et al., 2006). Os taninos condensados atuam na diminuição da carga larval e, consequentemente, reduzem a carga parasitária no ambiente. Entretanto, quando o hospedeiro já está infectado com uma carga grande de adultos, ocorre apenas alteração da função reprodutiva dos nematódeos, reduzindo, portanto, o OPG e consequentemente a contaminação da pastagem (Paolini et al., 2003). O conhecimento da epidemiologia dos nematódeos é primordial, já que os taninos condensados agem na descontaminação das pastagens, diminuindo a incidência de manifestações clínicas da doença e, principalmente, diminuindo a pressão de seleção sobre os isolados de nematódeos gastrintestinais. Com isso, pode-se minimizar o aparecimento do fenômeno da multirresistência às drogas anti-helmínticas e, até mesmo, prolongar a eficácia das drogas em uso na atualidade e das que serão lançadas posteriormente (Yoshihara et al., 2011).Materiais e Métodos
A coleta foi realizada na cidade de Sertânia-Pe, Brasil, em área de Caatinga preservada, na microrregião do Sertão do Moxotó (08°04’25” S; 37°15’52” O). A espécie utilizada foi a Mimosa tenuiflora (Willd) Poiret. Na área de coleta foram escolhidas aleatoriamente cinco plantas da espécie, em estágio fenológico estabelecido, sendo coletada de cada uma delas, amostras de folhas com hastes. A determinação de taninos condensados (TC) foi realizada pelo método de quantificação por fenóis precipitável em proteína (PPP) ou método BSA (Hagerman & Butler, 1978). As amostras de fezes foram obtidas de 12 caprinos Saanen, com idade aproximadamente de 5 a 6 meses, infectados naturalmente por nematódeos gastrintestinais. Os animais foram criados em sistema intensivo sob apriscos suspensos na Clínica de bovinos UFRPE-Unidade Acadêmica de Garanhuns (UAG). As amostras de fezes foram coletadas individualmente, diretamente da ampola retal dos animais. Para elaboração dos tratamentos, inicialmente foram realizados exames coprológicos imediatamente após a coleta das amostras fecais. Para a contagem de ovos por grama de fezes (OPG) de nematódeos gastrintestinais, foi empregada a técnica (Gordon & Whitlock, 1939) modificada (Whitlock, 1948), utilizando-se 2 g de fezes de caprinos diluídas em 58 mL de solução hipersaturada de açúcar. A eficácia foi avaliada pelo teste de desenvolvimento larval (TDL), utilizando-se as concentrações 37,5; 75; 150; 300; 350 mg/ml de extrato de taninos condensados. Os ensaios foram acompanhados por um controle positivo 7,5 mg/ml de Cloridrato de levamisol (Zoetis®) e controle negativo em H2O. Os valores de larvas desenvolvidas por grama de fezes (LDPG) foram transformados em log (x + 10) e os números de L3 convertidos em valores relativos ao número total de ovos e larvas em cada repetição.Resultados e Discussão
As análises foram realizadas com extratos exclusivos de folhas com haste. Estes extratos se apresentaram livres de sais inorgânicos, terpenos, saponinas, ou qualquer outro composto orgânico, apresentando apenas o isolado de taninos condensados, que foi revelado através de reagentes específicos. Sua quantificação foi expressa em 197,02 g/kg MS. Em análise prévia para a identificação dos gêneros de nematódeos presentes, foram realizadas coproculturas e incubadas simultaneamente aos testes de desenvolvimento larval para a obtenção das larvas infectantes. Na coprocultura, foram identificados nematódeos do gênero Haemonchus sp. (98.8 %), e também do gênero Trichostrongylus sp. (0.12 %). Nos testes in vitro, as folhas com hastes de M. tenuiflora mostraram-se eficazes na inibição do desenvolvimento larval contra o gênero Haemonchus spp. e Trichostrongylus spp. Valores acentuados de eficácia foram obtidos na inibição do desenvolvimento larval pela administração da concentração de 350 mg/mL de extrato de TC, mais especificamente com 99,6% de eficácia (Tabela 1). O percentual de inibição do desenvolvimento larval in vitro administrando as concentrações entre 37,5 e 350 mg/mL de M. tenuiflora variou entre 35,9 e 99,6% de eficácia de inibição do desenvolvimento, respectivamente. Com a menor concentração de 37,5 mg/mL de TC o grau de inibição do desenvolvimento se apresentou um pouco superior ao controle negativo, enquanto a maior concentração do extrato com 350 mg/mL, que obteve a maior letalidade dentre os tratamentos, não diferiu estatisticamente do controle positivo (Cloridrato de Levamisol - Zoetis®). Adicionalmente, o potencial anti-helmíntico do extrato purificado de tanino condensado de M. tenuiflora pode ser comprovado por suas respostas de letalidade nos ensaios, onde a inibição do desenvolvimento larval em proporção média de 50%, foi obtida na dose letal (DL) de 66,6 mg/mL de extrato purificado de TC. Em nosso trabalho, encontramos resultados semelhantes as observações de Son-de Fernex et al. (2012) que avaliaram à atividade anti-helmíntica de TC extraídos de cinco diferentes plantas, e constatou que houve um efeito inibidor sobre a motilidade e desembainhamento de larvas de H. contortus. A habilidade dos TC se ligarem às proteínas e alterar as propriedades físicas e químicas das mesmas devem ser considerados, especialmente porque a bainha e a cutícula dos nematódeos são compostas de prolina e hidroxiprolina (Fetterer & Rhoads, 1993). Estruturas químicas enriquecidas de hidrogênio, suficientes para proporcionar ligações fortes.Conclusões
A utilização do extrato de taninos condensados de folhas Mimosa tenuiflora (Willd) Poiret. apresentou ser uma alternativa com alto potencial no uso como anti-helmíntico em caprinos devido ao sua elevada eficácia na inibição do desenvolvimento larval de nematódeos in vitro. Entretanto, ainda é necessário entender o exato mecanismo de atuação dos taninos condensados sobre os as larvas.Gráficos e Tabelas
